Asitlik oranı, zeytinyağının kalitesini belirlemede en çok kullanılan kimyasal göstergelerden biridir. Serbest yağ asitlerinin yüzdesi olarak ifade edilir ve düşük asitlik, genellikle taze ve iyi işlenmiş zeytinyağının işaretidir. Natürel sızma zeytinyağlarında asitlik oranı %0.8’in altında olmalıdır. Yüksek asitlik, zeytinin hasat sonrası kötü muhafazası, olgunlaşma aşamasındaki gecikmeler veya hatalı üretim süreçleri sonucu ortaya çıkar. Asitlik, hem tat hem de aroma profilini etkiler; yüksek asitlik yağda bozukluk ve kötü tatlara yol açabilir. Laboratuvar analizleriyle ölçülen asitlik, zeytinyağı sınıflandırmasında temel kriterdir.