Zeytinlerin hasat zamanı, zeytinyağının kalitesini belirleyen en kritik faktörlerden biridir. Olgunlaşmamış yeşil zeytinler genellikle erken hasat dönemi olarak adlandırılır ve bu zeytinlerden elde edilen yağlar yüksek polifenol içeriği sayesinde daha acımsı ve aromatik olur. Bu tür yağlar sağlık açısından oldukça faydalı olmakla beraber, aromaları güçlü olduğu için bazı tüketicilere alışması zor gelebilir. Öte yandan, olgunlaşmış siyah zeytinlerden yapılan yağlar tadı daha yumuşak ve meyvemsi olur ancak polifenol oranları azalır. Hasat sırasında zeytinlerin zarar görmemesi de kalitenin korunması için önemlidir. Toplama işlemin mekanik ve nazik olması, zeytinin oksidasyona uğramasını ve çürümeyi engeller. Ayrıca, hasadın hızlı yapılması zeytinin hızlıca işlenmesine olanak tanır, böylece yağın taze aroması ve besin değerleri korunur. Hasadın gecikmesi veya yanlış koşullarda saklanması yağın kalitesini düşürür, acı ve keskin tatların artmasına neden olabilir.